keuze aminozuren en metabolieten voor HPLC/UPLC

[lisa.1911]

Hoi allemaal!

Ik ga voor mijn stage een onderzoek doen naar de detectie van aminozuren en enkele metabolieten in bloed met de HPLC/UPLC. En met dit onderzoek zal ik proberen vast te stellen of het mogelijk is om de tijd van depositie van een bloedspoor te bepalen. Ik zal dus kijken naar de toe- en afname van verschillende aminozuren en metabolieten uit bloedsamples van verschillende tijden.

Ik moet kiezen welke aminozuren en metabolieten ik wil onderzoeken, en ik heb wat moeite met kiezen. Ik geef de voorkeur aan aminozuren en metabolieten die fluorescerend zijn, zodat ik geen derivatiseringsstap hoef uit te voeren. Ik dacht aan Tryptofaan, Fenylalanine en Tyrosine. Maar ik weet niet zeker of deze aminozuren ''te groot'' zijn om te detecteren met de HPLC? Ik kan moeilijk op internet vinden welke aminozuren geschikt zijn voor de detectie met de HPLc/UPLC. Ik weet ook niet echt of ik metabolieten moet kiezen die uit deze aminozuren worden gevormd, zoals kyruenine en norharman. of om gewoon willekeurige andere (fluorescerende) metabolieten te kiezen. Mijn leraar had het over het kiezen van oxidatiemetabolieten, maar ik kan niet echt vinden wat de oxidatiemetabolieten zijn van Trypophan, Fenylalanine en Tyrosine. En ik begrijp niet goed waarom ik dan oxidatiemetabolieten zou moeten gebruiken.
Enkele aminozuren/ metabolieten die ik nu interessant vond om bij mijn onderzoek te gebruiken zijn:
- Tryptofaan, L-Isoleucine, Ergothioneine, Pyroglutaminezuur, Kynureninezuur, Kynurenine, hypoxanthine, Indool-3-azijnzuur, anthureenzuur, Beta-carboline, Riboflavine, Flavin adenine dinucleotide.

Graag hoor ik wat jullie zouden kiezen (mag ook een totaal andere keuze zijn dan de opties hierboven) als jullie dit onderzoek zouden doen!

Alvast bedankt.

[Marko]

HPLC is geen detector maar een scheidingstechniek. Wat je kunt scheiden hangt eerst en vooral af van de kolom. Maar geen enkel aminozuur is normaal gesproken te groot voor HPLC. Sterker nog, je kunt hele peptides en eiwitten analyseren met LC-MS dus een simpel aminozuur is echt geen issue.

Wat betreft de keuze voor aminozuren: ik denk niet dat je dat moet laten afhangen van derivatiseren of niet. Zo moeilijk is het niet om een derivatisering-stap op te nemen in de methode. Ik zou zeggen: kies degene die het meest geschikt zijn, dat wil zeggen, waar de concentratie het meest van verandert in de tijd, en als het voor de detectie dan nodig is om te derivatiseren, dan doe je dat.

Waarom oxidatieve metabolieten: omdat een bloedspoor blootgesteld wordt aan zuurstof uit de atmosfeer en dus langzaam zal oxideren.

[lisa.1911]

Beste Marko,

Bedankt voor de informatie, ik liep echt vast. Ik ga in de literatuur opzoek naar de aminozuren waarvan de concentratie het meest verandert in de tijd! bedankt!