sciencetalk

Beste chemist,

Ik moet toegeven, als biologe zou ik dat moeten kunnen oplossen, en eens ik daar weer mee weg ben, lukt het ook goed. Jammer genoeg is dit jaren geleden en heb ik dit nooit meer gedaan, daarom ben ik nu heel onzeker. Graag had ik daarom wat hulp bij de berekening.

Ik zou graag een BICINE buffer samenstellen. Ik heb reeds volgende oplossingen gemaakt, dat was geen probleem:

50mM Bicine (C6H13NO4 met pKa 8,35)

10mM NaCl

1mM EDTA

0,1mM PMSF (8-Phenylmethylsulphonylfluorid)

PMSF werd opgelost in isopropanol, want is niet oplosbaar in water.

Die bufferoplossing wil ik dan met behulp van 1M NaOH op een pH van 8,2 brengen.

Van al deze oplossing moet ik dus die BICINE-buffer maken. Is het dan goed om van elk (t.t.z. van Bicine, NaCl, EDTA en PMSF) bijvoorbeeld 0,25l te nemen en dan aan te lengen met NaOH om een pH van 8,2 te bekomen? Of zie ik dit nu helemaal verkeerd? En hoe bereken ik dit?

Met vriendelijke groet en hartelijk dank! U helpt me zeer!

Floere

Wat ik begrepen heb van mijn leraar is dat een buffer die met lage concentraties temaakt is (dus 1 mM) een laag bufferende werking heeft. Als je dan NaOH gaat toevoegen (titreren) tot een pH van 8,2 lijkt het me geen goede buffer meer.

Je kunt beter kijken naar de pKz van het zuur of de pKb van de basische stof.

Het ligt er ook aan wat voor buffer :S Daar is mijn chemlevel te laag voor om uit te leggen . Dus als de pKz rond de 8,2 is kan het wel.

Hallo,

De buffer wordt gebruikt om carbonic Anhydrase (CA) (enzym) te isoleren uit een bodem (dus als isoleermedium). Het is natuurlijk de bedoeling het CA niet kapot te maken, want ik zou graag de enzymatische activiteit daarvan willen bepalen (door ph-drop).

Vriendelijke Groeten,

Floere

Hallo,

Ondertussen ben ik gelukkig al tot de bufferoplossing gekomen. Eigenlijk was dat heel gemakkelijk, ik moest gewoon wat langer doorredeneren. ´t Probleem is dat ik weinig tijd heb en als ik dan ook een fout maak, is dat niet zo goed.

Ik heb dus uiteindelijk 1l bufferoplossing, nu moet ik enkel nog met 1M NaOH titreren tot pH 8,2. Zou ik dat eenvoudig kunnen bereken of zou ik beter 1M NaOH oplossing maken dit in een buret doen en toevoegen tot ik zelf pH8,2 bekom (nameten met pH-meter)?

Vriendelijke groet,

Floere

Ik zet zelf de oplossing op een magneetroerder in een grote kolf of bekerglas en hang de pH elektrode in de oplossing en voeg dan met een druppelpipet oid NaOH toe tot de goede pH.