sciencetalk

Hallo,

Ik had een vraag over het kweken van Heliobacteria (Helio. mobilis).

Ik moet deze cellen labelen met ¹⁵N. Dus om deze reden mag het medium waarin ik het laat groeien niet te veel bronnen van stikstof bevatten, want dit geeft problemen met verder onderzoek hierop. Tot zo ver kom ik alleen maar medium's tegen die "Yeast" bevatten maar omdat dit dus ook stikstof bevat kan ik deze media niet gebruiken.

Ik heb 1 medium gevonden, maar ze groeien hier relatief traag in. 1 oplossing zou zijn, denk ik, om de concentraties van the stoffen die in het medium zitten te verhogen.

Ik zou graag willen weten of jullie ideeen hebben die ik zou kunnen proberen.

Hoi Epyon en welkom op het forum

Waarom niet een gewoon medium nemen en dan voortijdig (na voldoende ontwikkeld te zijn) de platen uit de broedstoof halen en in een koelkast/vriezer plaatsen om de ontwikkeling te stoppen.

Maar als ik een normaal medium gebruik dan zitten er meerdere stikstof bronnen in dus krijg ik dan niet het probleem dat de H. mobilis niet ¹⁵N gelabeld is? of alleen maar een klein gedeelte gelabeld is.

Hi Epyon,

Het is moeilijk om een medium te vinden waarin alle stikstof 15N is. Begrijp dat het heel duur is deze zeldzame 15N stikstof bronnen te maken.

Het labelen van bacteriën (of andere cellen) met 'zware' isotopen (15N, 14C, etc.) wordt ook gebruikt voor massaspectrometrie (SILAC: 'Stable Isotope Labeling With Amino Acids').

Hierbij maakt men gebruik van het feit dat niet alle aminozuren door een organisme zelf kunnen worden gemaakt (of modificeren het organisme). Je kunt zelf gaan zoeken welke aminozuren H. mobilis niet zelf kan aanmaken (essentiële aminozuren).

Het medium kunt je zelf maken door alle essentiële aminozuren te bestellen en hier je gelabeld isotoop aan toevoegen. Denk ook na of het erg is als dit aminozuur weer wordt verbouwt tot een ander aminozuur (naast arginine ook proline wordt gevormd bijvoorbeeld, wat bij massaspectrometrie ongunstig is).

Overigens is deze methode zo populair dat grote bedrijven aanbieden je medium naar wens samen te stellen.

Succes,

TK

Bedankt voor je reactie, de reden waarom ik ze wil labelen is vanwege een bepaald experiment met de vaste stof 15N-NMR.

Ik had al een medium getest die werdt genoemd in een artikel dat ik gelezen had maar helaas zonder succes. Ik ben zelf niet echt bekent met bacterien etc, maar het is een onderdeel van mijn opdracht