sciencetalk

Hallo,

Voor een practicum moeten wij een biogas producerende bacterie ophopen. Wij hebben het volgende bedacht. We gebruiken mest als grondstof. Hier zullen 4 stappen plaats vinden namelijk de Hydrolyse, Verzuring, Azijnzuurvorming en Methaanvorming. Dit laatste wordt dus gedaan door methanogene bacterien. Deze laatste stap is dus voor ons het belangrijkst. Wij willen uiteindelijk deze bacteriën reinstrijken. En hem in een erlenmeyer met boterzuur laten groeien. Door hieraan een zakje te binden dat wordt vacuum gezogen kan later geconstateerd worden dat er gasvorming plaatsgevonden heeft. wij vragen ons echter af wat de beste manier is om deze bacterie apart te kunnen nemen. Wij zaten zelf te denken aan op een voedingsbodem alle bacterieën te laten groeien en verschillende colonieën in aparte erlenmeyers te laten groeien. Maar de kans dat we dan de juiste bacterie hebben is dan maar klein gezien er veel bacterien groeien. We zouden dit kunnen beperken door de bacterien in agar met boterzuur te brengen en dit vervolgens te gieten zodat de bacterien anaeroob kunnen groeien. Als we hier de cultuur van nemen zou het dan goed moeten komen? En wat is eventueel een betere manier?

Mvg. Ruud

Niet alle bacteriën groeien op alle bodems dus je kan een selectief medium gebruiken. Bijvoorbeeld bloedplaten, MacConkey agar, etc.

Zie hier.

Helpt dit je voorlopig voldoende verder?

Ruudws schreef: ↑di 19 feb 2013, 01:19
Wij vragen ons echter af wat de beste manier is om deze bacterie apart te kunnen nemen. Wij zaten zelf te denken aan op een voedingsbodem alle bacteriën te laten groeien en verschillende koloniën in aparte erlenmeyers te laten groeien. Maar de kans dat we dan de juiste bacterie hebben is dan maar klein gezien er veel bacteriën groeien. We zouden dit kunnen beperken door de bacteriën in agar met boterzuur te brengen en dit vervolgens te gieten zodat de bacteriën anaeroob kunnen groeien. Als we hier de cultuur van nemen zou het dan goed moeten komen? En wat is eventueel een betere manier?

Je zult inderdaad voor anaerobe kweekcondities moeten gaan, omdat methanogene bacteriën (obligaat anaeroob) alleen aan anaerobe celrespiratie doen en juist geremd worden in groei en deling door aanwezigheid van zuurstof.

De methode om deze obligate anaeroben te cultiveren is de ‘Roll-Tube Method’ van Hungate, plus alle nieuwere varianten en ‘verbeteringen’ zoals beschreven in de literatuur (1-10).

Je hebt verder zoals je al opmerkte te maken met andere microbiële flora en overige contaminatie als je met mest uit een stal aan de gang gaat. Volgens mij kan mest een variatie aan micro-organismen bevatten, afhankelijk van hoe ‘vers’ het is of hoe het is opgeslagen. Dit hoeft in principe geen probleem te zijn, maar het is een beetje afhankelijk van wat voor middelen je tot je beschikking hebt. Aeroben zullen sowieso niet groeien, omdat je alles anaeroob gaat inzetten. Als je nog een mogelijkheid bedenkt waarmee je de methanogene activiteit of methaanproductie kunt meten, kun je gedurende een periode om de [x] aantal dagen culturen daarop selecteren.

Ik schiet tekort in praktijkervaring (gelijk aan nul) om echt wat zinnigs over de methodes te vertellen.

Onze Duitse buren bij DSMZ hebben wel een protocol / procedure op de website waar meer praktische informatie in te vinden is.

http://www.dsmz.de/f...englAnaerob.pdf

Wel weer interessant allemaal, heb zelf ook heel wat geleerd

1. The Roll-Tube Method for Cultivation of Strict Anaerobes

Hungate RE, Macy J

No. 17, Modern Methods in the Study of Microbial Ecology (1973), pp 123-126

Vol 3B, Methods in Microbiology (J. R. Norris and D. W. Ribbons), pp 117-132

2. Commentary on the Hungate technique for culture of anaerobic bacteria

Bryant MP

American J Clin Nutr. 25: December 1972, pp 1324-1328

3. The Biology of Methanogenic Bacteria

Zeikus JG

Bacteriol. Rev. 1977 Jun;41(2):514-41 (vanaf blz. 515)

4. Use of syringe methods for anaerobiosis

Hungate RE, Macy J, Snellen JE

Am J Clin Nutr. 1972 Dec;25(12):1318-23.

5. A serum bottle modification of the Hungate technique for cultivating obligate anaerobes

Miller TL,Wolin MJ

Appl. Microbiol. 1974 May;27(5):985-7

6. Techniques for cultivating methanogens

Wolfe RS

Methods Enzymol. 2011;494:1-22

7. Microbial formation of methane

Wolfe RS

Adv in Microbial Physiology vol 6 APL, Vol. 6

8. Methanogens A New Perspective --> http://www.ncbi.nlm....v00006-0148.pdf

Balch WE, Fox GE, Magrum LJ, Woese CR, Wolfe RS

Microbiological Reviews, June 1979, p. 260-296 Vol. 43, No. 2 (vanaf blz. 262)

9. New Method for the Isolation and Identification of Methanogenic Bacteria

Edwards T, McBride BC

Applied Microbiology, Apr. 1975, p. 540-545, Vol. 29, No. 4

10. Hydrogen-oxidizing methane bacteria. I. Cultivation and methanogenesis

Bryant MP, McBride BC, Wolfe RS

J Bacteriol. 1968 Mar;95(3):1118-23.

Overzicht:

Differential Approaches for Studying Methanogens: Methods, Analysis and Prospects

Shivadutta Singh L, Mazumder PB