sciencetalk

Is er een manier om de interactie tussen cellen van het afweersysteem en tumorcellen zichtbaar te maken (met bijvoorbeeld BLI of FLI o.i.d.)?

Bedankt!

Hallo,

Wij dachten zelf aan het volgende:

We plaatsen een luciferase gen naast de nagemaakte promotor van een gen dat veel wordt afgelezen (bijvoorbeeld EGFR, RAS, of een ribosomaal gen). Dit wordt in een tumorcel ingebracht en de tumorcel wordt in de muis gebracht. De tumorcel is nu gekleurd. Nu gaan we de immuuncellen kleuren. We kleuren de lymfoblast want hier komen de lymfocyten uit voort, dit kleuren we met een andere kleur van luciferase (weer een gen dat veel wordt afgelezen). Dan maken we een foto, door gebruik te maken van een CCD camera, die vangt alle fotonen op en maakt er een plaatje van. Deze foto bekijken we en waar beide kleuren te zien zijn, is de interactie tussen tumorcellen en immuuncellen.

Iemand enig idee of dit mogelijk is? Suggesties waar we moeten veranderen?

NB het is slechts een experimentele opzet om na te denken over de mogelijkheden, dus geen opzet voor een echt onderzoek.

Bedankt..

He trude,

Als ik het dus goed begrijp, wil je in vivo interacties tussen immuuncellen en tumor visualiseren?

dus niet invasief?

Of wil je dat doen, nadat muizen zijn opgeofferd: Dus plakjes tumorafsnijden en kleuren.

Eerst optie lijkt mij niet erg haalbaar, denk dat de resolutie niet goed is.

Ik zou de tumor eruit halen en dan coupes voor specifieke markers aankleuren. an bijvoorbeeld NK cellen of Tcellen

Waarom muizen gebruiken? Zebravissen laten het toe om de hele embryo te visualiseren. Tumorcellen kunnen geimplanteerd worden. Macrofagen en neutrofielen kunnen aangekleurd worden met mpx en mpeg transgenen (zowel in GFP and mCherry).

Terug naar je muizen:

Waarom wil je trouwens luciferase gebruiken? GFP, mCherry, tdTomato etc zijn veel gebruikelijker.

Als je interactie tussen het immuunsysteem en een tumor wil laten zien dan zal je dit strikt genomen door middel van lokalisatie studies niet kunnen doen. Als je het netjes wil doen zal je een FRET experiment op moeten zetten.

Zowel lokalisatie als fret studies kunnen worden gedaan door speciale imaging windows die je implanteert in de muis. Je gaat hier hoe dan ook con-focal en multi-foton microscopen voor nodig hebben.