PuzzelsIs er iemand van jullie die iets kent van cDNA-synthese?
Daarbij gebruik je een mastermix en daaraan wordt DTT of dithiotriëtol toegevoegd. Dat is een reducerend agens, het breekt dus zwavelbruggen.
Nu vroeg ik mij af wrm dat wordt toegevoegd aan die mastermix? Om tertiaire van het mRNA te verbreken msh? Hoewel, vormt mRNA S-bruggen dan?
Ik hoop dat iemand mij kan helpen.
Zwitterion
-
zwitterion
- Artikelen: 0
- Berichten: 108
- Lid geworden op: ma 30 jan 2006, 18:11
Mastermix cdna-synthese
Everything is chemistry.
ads
Steun Sciencetalk
Smarfer - Magnetische pictogrammen voor weekplanner - 50 stuks - Planbord kind - Binneneditie
Re: Mastermix cdna-synthese
Ik heb even wat gezocht en mijn eigen vermoeden werd deels bevestigd: waarschijnlijk dient het (mede) om de RNAses, die eigenlijk altijd wel aanwezig zijn, te inactiveren. Maar je kunt de discussie hierover hier even nalezen.
Ik wou dat ik een elektron was, dan kon ik altijd paren
Re: Mastermix cdna-synthese
Voor zover mij bekend wordt het daar inderdaad voor gebruikt. Ook bijvoorbeeld cRNA probes voor ISH worden vaak 'beschermd' met DTT, waar na synthese van de probe geen enzymen meer voor nodig zijn. Uit mijn hoofd doe ik het zelf met een paar ul 2,5 M: een flinke dosis.
Zoals wordt opgemerkt in de discussie waar Bas naar verwijst zou mercaptoethanol dezelfde functie hebben, hoewel dat een stuk giftiger is dan DTT (en een veel sterkere geur heeft, waar ik zelf echt een hekel aan heb).
Omdat er in principe geen zwavel voorkomt in RNA zou ik er niet van uit gaan dat mRNA een structuur vormt met S-bruggen.
Zoals wordt opgemerkt in de discussie waar Bas naar verwijst zou mercaptoethanol dezelfde functie hebben, hoewel dat een stuk giftiger is dan DTT (en een veel sterkere geur heeft, waar ik zelf echt een hekel aan heb).
Omdat er in principe geen zwavel voorkomt in RNA zou ik er niet van uit gaan dat mRNA een structuur vormt met S-bruggen.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-
-Calvin-
-
zwitterion
- Artikelen: 0
- Berichten: 108
- Lid geworden op: ma 30 jan 2006, 18:11
Re: Mastermix cdna-synthese
Dus eigenlijk heeft DTT 2 belangrijke functies: destabiliseren van Rnasen en stabilisatie van het reverse transcriptase.
Ik heb ook al hier en daar gelezen dat het secundaire mRNA-structuren zou verwijderen. Maar inderdaad, waar komt die zwavel dan vandaan...
Ik heb ook al hier en daar gelezen dat het secundaire mRNA-structuren zou verwijderen. Maar inderdaad, waar komt die zwavel dan vandaan...
Everything is chemistry.
Re: Mastermix cdna-synthese
Een reverse transcriptase (RT) is ook een enzym en dus zou ik verwachten dat het net zo als een RNase gedenatureerd wordt DTT.Dus eigenlijk heeft DTT 2 belangrijke functies: destabiliseren van Rnasen en stabilisatie van het reverse transcriptase.
Dit is echt zo'n voorbeeld waar heel veel mensen heel veel verschillende dingen over zeggen. En niemand lijkt te weten wat nou waar is.. ook dat kan soms bij wetenschap horen.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-
-Calvin-
ads
Steun Sciencetalk
Double A Premium printpapier ft A4, 80 g - 2500 vellen (Doos met 5 pakken van 500 vel)
Steun Sciencetalk
Nuvance SD Kaart Lezer - 3 in 1 - Micro SD Kaart - USB naar USB C - 8-Pin - Geschikt voor alle Telefoons, Tablets & Laptops
Steun Sciencetalk
5 stuks Plastic Labels 91201 geschikt voor Dymo LetraTag Labelprinter - Zwart op Wit - 12 mm x 4 m - S0721610 Labeltape - Telano
-
zwitterion
- Artikelen: 0
- Berichten: 108
- Lid geworden op: ma 30 jan 2006, 18:11
Re: Mastermix cdna-synthese
Het punt is dat ik dat moet weten voor de verdediging van mijn project, als ze mij die vraag stellen. Altijd vervelend als er geen sluitende antwoorden zijn, maar ik kan natuurlijk altijd zeggen dat er discussie over is 
Everything is chemistry.
Terug naar “Moleculaire biologie en biochemie”
