[biologie] Isolatie van RNase en DNase

[SjefkeC]

Voor een project op school krijg ik de vraag wat je moet doen om RNase te isoleren en wat je moet doen om DNase te isoleren.
 
Helaas heb ik hier geen antwoord op kunnen vinden en hoop middels deze kreet hier meer duidelijkheid over te krijgen.

[Themisto]

Zou je misschien de details van de vraag willen geven? En wat heb je zelf al bedacht?

[SjefkeC]

Het gaat hier om een vraag die gesteld word in de context van een DNA isolatie uit plantaardig materiaal.
 
Hierbij de exacte vraagstelling
Wat moet je doen om RNase vrij te werken?
Wat moet je doen om DNase vrij te werken?
 
Bij het meermaals doorlezen heb ik de vraag geïnterpreteerd als hoe werk ik stof x vrij, oftewel hoe isoleer ik stof x en ben ik hier dus op gaan zoeken. Nu ik de vraag nogmaals doorlees kan de vraag ook betekenen 'Hoe zorg je ervoor dat je geen RNase/DNase in je monster hebt zitten?'
 
Bij de 'oude' vraagstelling heb ik het gevoel dat het iets te maken zou kunnen hebben met de wijze waarop de cel word opengebroken.
 
Met het licht op de nieuwe vorm van vraagstelling heb ik het gevoel dat dit te bereiken is middels een denaturatie van de desbetreffende eiwitten, maar ik weet niet of ik daarmee in de goede richting denk, want bij een verhitting zal het DNA ook denatureren.

[Jaffaa]

Ik snap op dit moment niet echt de gedachtegang van 'oftewel hoe isoleer ik stof x', ik denk namelijk niet dat je dingen moet gaan proberen te isoleren.
 
Ik denk dat de vraag te maken heeft met de eventuele DNases en Rases die aanwezig zijn op bijvoorbeeld je handen, pipetpunten etc.  en hoe die er voor kunnen zorgen dat je DNA/RNA word afgebroken in je reactie... Hier zijn genoeg standaard procedures voor, je moet super schoon werken, zoek op wat dat inhoud.
 
verder zijn er naar mijn weten ook protocollen die tijdens je DNA isolatie de enzymen inactiveren, lees bv: https://www.researchgate.net/post/What_is_the_best_way_to_inhibit_DNAseI

[ArcherBarry]

Opmerking moderator

Dit onderwerp past beter in het huiswerkforum en is daarom verplaatst.

[Wouter_Masselink]

Dit klinkt alsof een engelstalige vraag direct in het Nederlands is vertaald. 
 
What do you have to do in order to work RNAse/DNAse free?
 
Het gaat hierbij dus om enzymatische inactivatie en het voorkomen van besmettingen.
 
Het voorkomen van besmettingen is een kwestie van schoon werken en alles voordien met ethanol schoon poetsen.
enzym inactivatie kan door middel van co-factor chelatie (denk aan bijvoorbeeld EDTA) maar ook temperatuur inactivatie (alles op ijs uitvoren). Verder zijn er nog commercieel verkrijgbare RNAse en DNAse inhibitors te krijgen.
 
In de praktijk is DNAse veelal een minder groot probleem dan RNAse. Het protocol wat ik gebruik voor RNA isolatie gebruikt een combinatie van RNA later (geweldig goedje, weefsel erin en klaar, geen geknoei met vloeibare stikstof). Vervolgens kan het via Phenol/Chloroform en RNA isolatie kolommen opgezuiverd worden. Ook een tip die in de praktijk veel verschil kan maken is vlot werken. Als je de enzymen gewoon geen tijd geeft om iets de degraderen, dan zal het eind resultaat ook veel beter zijn.