Mobiele fase

[Marie-Louise_CF]

Hoi,

Ik ben met verschillende testen bezig op de HPLC. Een van de dingen waar ik naar gekeken heb is de mobiele fase. De mobiele fase die ik standaard bij deze bepaling gebruik is:

1450 ml chloroform, 950 ml n-heptaan, 100 ml MeOH, 12.5 ml THF en 1.25 ml HAc. (Mob 1)

Ik heb de hoeveelheid van n-heptaan gevarieerd met - 10% (Mob 2) en + 10% (Mob 3).

De retentieijden veranderen als volgt:

Mob 1. 2,581 min;

Mob 2. 2,487 min;

Mob 3. 2,689 min.

Des te meer n-heptaan des te groter de retentietijd. Maar meer organisch betekend toch een kortere retentietijd? Wie kan mij helpen?

[Napoleon1981]

Als jij niet zegt wat voor kolom (dus type chromatografie) je gebruikt, dan kan niemand je verder helpen.

Meer organisch? Alle componenten die jij gebruikt als mobiele fase vallen onder deze noemer, je gaat van 100% organisch naar 100% organisch. Je gebruikt normal phase chromatografie?

Hint: wat gebeurd er met de polariteit van de totale oplossing? In het geval van normalphase, wat adsorptie chromatografie is, welk soort loopmiddel zal de geadsorbeerde analiet moleculen beter "displacen"?

[Marie-Louise_CF]

Oh sorry.

Ik gebruik een chromspher Si. (reversed phase chromatografie)

[Napoleon1981]

Weet je zeker dat dit geen Normal phase is? Si staat voor silica, dit is dus normal phase chromatografie.

In normal phase chromatografie gebruik je organische oplosmiddelen, en vaak acetic acid om te komen dat er water in je systeem komt, wat de silica deactiveert.

[Marie-Louise_CF]

Ik ging dr van uit wat mn stagebegeleider zegt.

Silicagel is polair.

Mn te bepalen component is apolair

Mobiele fase is apolair.

De retentietijd wordt langer dan zal de mob fase meer polair worden, omdat de component langer in de stationaire fase verblijft.

[Napoleon1981]

Goed het zit dus zo.....

1) Vergeet het principe verdelings chromatografie, wanneer je normal phase gebruikt.

2) Silicagel is idd de polaire fase. Silica gel is ook vast, dus het analiet adsorbeert aan je silica gel

3) Hoe krijg je het van silicagel af? door het weg te duwen met iets dat polair is.

Wanneer jij dus meer heptaan gaat gebruiken neemt de polariteit van je solvent af, dus ook het vermogen om geadsorbeerd analiet te verdringen van het vaste silica ----> gevolg retentie tijd neemt toe.

[Marie-Louise_CF]

SUPER! Dank je wel!