Vraag nadeel Gateway klonering

[Klaas99]

We voeren een mutatie in het open leesraam van muis caspase-3 in het pLT-mcaspase-3 p30 plasmide door middel van de Quikchange techniek. Na identificatie van de goede clones door middel van restrictie-analyse en sequeneren van het gekloneerde muis caspase-3 DNA fragment werken we verder met dit gemuteerde plasmide.

Er wordt dan gevraagd welk potentieel gevaar er schuilt in deze werkwijze en welke extra stap je zou kunnen doen om dit probleem te vermijden.

Iemand die hierbij kan helpen?

[Wouter_Masselink]

Het grote nadeel met alle methoden die een heel plasmide proberen te amplificeren is dat je makkelijk een foutje kan introduceren. Tenzij je het hele plasmide vervolgens weer sequenced is het mogelijk dat je een kleine mutatie kan missen. Als je alleen het caspase-3 DNA fragment sequenced is het mogelijk dat je kleine amplificatie foutjes zal missen.