Cholesterol spiegel spectrofotometrisch meten.

[Vemusa]

Hoe kunnen de cholesterol spiegels spectrofotometrisch worden gemeten?

Ik heb al veel gezocht, en in eerste instantie dacht ik dat dit met NMR kon. (Nucleair Magnetische Resonantie) Maar, tijdens mijn verdere zoektoch naar informatie over NMR kwam ik zelfs artikelen tegen, die beweerden dat NMR bijna niet meer bestond, en dat er allerlei haken en ogen aan deze techniek zaten.

Vervolgens bedacht een klasgenoot, cholesterol methyleren, en dat spectrofotometrisch meten. Maar een goede uitwerking hiervan, konden wij niet vinden.

Kan iemand asjeblieft helpen?

<table border='0' align='left' cellpadding='3' cellspacing='0'><tr><td padding='0' celspacing='0' align='left'><font size='1'># Moderatoropmerking</font></td></tr><tr><td id='moderator'><font size='1'>Beryllium: vette tekst is erg schreeuwerig, gewone tekst van gemaakt.</font></td></tr></table>

<div class='postcolor'>

[Gerard]

Cholesterol is meer manieren spectrofotometrisch te meten, de meest gangbare is een enzymmatische en de ander is een chemische techniek identiek aan de referentie techniek van het WHO.

Ik heb nu de preciese voorschriften niet bij de hand, maar als je wilt kan ik ze voor je opzoeken.

foutje hersteld

[Vemusa]

Als je dat zou willen? Je zou me super helpen! Alvast heel erg bedankt!

<table border='0' align='left' cellpadding='3' cellspacing='0'><tr><td padding='0' celspacing='0' align='left'><font size='1'># Moderatoropmerking</font></td></tr><tr><td id='moderator'><font size='1'>Beryllium: vette tekst is erg schreeuwerig, gewone tekst van gemaakt.</font></td></tr></table>

<div class='postcolor'>

[Napoleon1981]

NMR is niet erg kwantitatief, soms kan het wel zo gebruikt worden, maar in dit geval niet. Monster is te complex.

[DrQuico]

Maar, tijdens mijn verdere zoektoch naar informatie over NMR kwam ik zelfs artikelen tegen, die beweerden dat NMR bijna niet meer bestond, en dat er allerlei haken en ogen aan deze techniek zaten.

In welke artikelen werd dit beweerd dan? Het is dè techniek voor struktuuropheldering, kwalitatieve en semi-kwantitatieve analyse binnen de organische chemie.

Overigens is NMR geen spectrofotometrische techniek, maar een spectroscopische techniek.

[Vemusa]

Ik kan het artikel zo gauw niet vinden. Maar er stonden dingen als dat het een achterhaalde techniek was, en 'slechts' een voorloper op de MRI.

Enfin, enzymatisch meten. Als ik het geod begrijp, zou het dan ong. in een versimpelde versie zo gaan:

Je voegt cholesterol + enzym samen. (welk enzym? Uit de biosynthese van Cholesterol?). Vervolgens meet je om de zoveel min in een spectrofotometer (wavelength?). Dan zet je dit uit tegen een ijklijn (van cholesterol?) en dan kan het cholesterol niveau met de formule berekend worden, die uit de ijklijn komt?

[DrQuico]

Ik kan het artikel zo gauw niet vinden. Maar er stonden dingen als dat het een achterhaalde techniek was, en 'slechts' een voorloper op de MRI.

Nou ja. Dat slaat echt nergens op. NMR is ongeveer net zo achterhaald als HPLC (niet dus)

Mocht je het artikel nog vinden dan zou ik het ook graag willen lezen.

[Beryllium]

Bovendien is MRI gewoon een NMR-techniek. Er wordt gezegd dat de medische wereld de afkorting MRI gebruikt omdat NMR vanwege het nuclear een negatieve klank zou hebben, ook al heeft het niks maar dan ook niks met radioactiviteit te maken...

[Gerard]

In de referentietechniek van het CDC wordt na verzeping van de cholesterolesters met alcoholische KOH oplossing het cholesterol m.b.v hexaan uit het serum geextraheerd. Na droogdampen wordt op het residu de Liebermann-Burchard reactie toegepast.

Enzymatische colorimetrische bepaling (als commerciele kits verkrijgbaar)

cholesterolesters + H₂O ----Cholesterolesterase---> cholesterol + RCOOH

Cholesterol + O₂ ---Cholesteroloxidase--> choles-4-en-3-one + H₂O₂

2 H₂O₂ + 4-aminophenazone + phenol --peroxidase-->4-(p-benzoquinone-monoimino)-phenazone + 4 H₂O

aflezen bij 505 nm

Een oud voorschrift voor de bepaling van cholesterol

Standaard cholesterol: 96,5 mg cholesterol/100 ml ijsazijn (2,5 mmol/l)

De volgende buizen pipetteren:

Blanco 0.20 ml H₂O met 0,50 ml ijsazijn

Standaard 0.20 ml H₂O met 0,50 ml ijsazijn

Monster 0.20 ml serum met 0.50 ml ijsazijn

Vanaf nu alle buizen hetzelfde behandelen.

5 ml azijnzuuranhydride toevoegen

goed mengen, 10 minuten laten staan en cetrifugeren

Pipetteer in buizen 3,0 ml centrifugaat.

1 ml para-tolueen sulfonzuur toevoegen, goed mengen en 30 minuten laten staan

0,4 ml H₂SO₄ (sm 1,84 g/ml) toevoegen, goed mengen en 20 minuten laten staan.

aflezen tegen de blanco bij 550 nm

[Vemusa]

Heel erg bedankt voor je hulp! Super! [!]

[Nedra]

Moet bij de standaard oplossing het water niet worden vervangen door de cholesterol oplossing anders heb je 2 blanco's?

Verder moeten de buizen 10 minuten staan en dan centrifugeren of 10 minuten centrifugeren en bij hoeveel rpm?

Bij welke temperatuur moet de buizen 30 en 20 minuten staan?

alvast bedankt

[Gerard]

Moet bij de standaard oplossing het water niet worden vervangen door de cholesterol oplossing anders heb je 2 blanco's? Klopt

Verder moeten de buizen 10 minuten staan en dan centrifugeren Ja

Centrifugeren bij hoeveel rpm? De standaard centrifuge voor afdraaien van bloed werd gebruikt ca 1500 G en 10 minuten zal genoeg zijn.

Bij welke temperatuur moet de buizen 30 en 20 minuten staan? Kamertemperatuur

[Nedra]

heel erg bedankt, maar heb je misschien ook nog een tip waar ik het principe van dit experiment kan vinden? :-k

[Gerard]

Zover ik het weet bindt cholesterol direct aan paratolueensulfonzuur onder vorming van een groengekleurde verbinding.

Als je wilt uitzoeken hoe het precies werkt zul denk ik in een bibliotheek moeten zoeken in boeken van ongeveer halverwege 20e eeuw.

[Nedra]

nogmaals dank je wel