[scheikunde] aantonen rEPO

[marieke21]

Ik zit met een vraagstuk: ik moet gaan bepalen op welke manier EPO het goedkoopst en snelst is aan te tonen in biologische vloeistoffen.

Ik ga er nu even vanuit dat er 2 vormen van epo wil aantonen : rEPO en darbepoetine alfa in urine

Het moet door middel van Immunochemische detectie, door specifieke detectie van koolhydraat gedeeltes die uniek zijn voor rEPO of darbepoetine, dus absent in humaan EPO.

Het is mogelijk om in muizen antilichamen te maken tegen beide vormen.

Met welke assay kan ik nu het goedkoopst, snelst en meest specifiek het aantonen?

met een

1. Normale Elisa

2. Sandwich Elisa (niet-competitieve elisa)

3. Competitieve Elisa

4. Inhibitie assay

...

Heeft iemand hier een idee over?

Bedankt alvast!

[Gerard]

Er is slecht een antichaam beschikbaar tegen rEPO en tegen darbepoetine daardoor zal een sandwich elisa niet makkelijk in aanmerking komen door de kans op aspecifieke binding van het secundaire anti muis antiserum dat gebruikt moet worden.

Mijn insteek zou een competitieve elisa zijn omdat ik verwacht dat deze het meest specifiek en gevoelig zal zijn.

Ik heb zelf alleen ervaring met het ontwikkelen van sandwich elisa's dus deze insteek is niet op ervaring gebaseerd dus :-k en misschien is er iemand aanwezig die er meer ervaring mee heeft.

typo

[stijn van eenoo]

Bij de gewone Elisa: moet je antigenen hebben ( een soort vinger afdruk van de stof, dit kan epo zijn of een ziekte ofzo), waarbij je dan de primaire anti-lichamen toevoegt( als je naar epo zoekt voeg je anti-lichamen toe die passen op de antigenen van epo), daarna voeg je de secundaire antilichamen toe ( die binden als een sleutel slot formatie op de primaire anti-lichamen) daarna voeg je een substraat toe die dan weer bindt op de secundaire anti-lichamen. dit substraat is enkel nodig om de vloeistof te laten kleuren als de ziekte (of het te onderzoeke product) zich in de oplossing bevindt. Hiermee kan je enkel opsporen of de ziekte aanwezig is of niet meer niet dus, deze test geeft niet zoveel informatie weer. hopelijk helpt dit je een beetje