Ethidium bromide

[UMBRELLA]

Misschien een stomme vraag, maar hoe zit het nou met Ethidium bromide bij maken van agarose gel. Bij maken van agrose gel wacht je tot dat gel beetje afgekoeld is (+/- 50 graden) en dan voeg je EtBr. Waarom doe je dat? Kan die soms verdampen of kan die soms onwerkzaam worden door hoge temperatuur.

Ik hoor namelijk dat het kan nog verdampen en bevat EtBr bestanddelen en andere kan dat die slechter werk of zo.

Kan iemand mijn misschien wat daar over zegen of bevestigen.

Al vast bedankt..

[Roy van Heesbeen]

Ik heb altijd begrepen dat EtBr inactief wordt op hogere temperaturen, maar ik ken ook labs waar ze de gel met de EtBr opkoken. Ik denk dat aerosolen van gel en EtBr niet bepaald gezond zijn, dus dat is denk ik de reden waarom het vaak niet op hoge temperaturen wordt toegevoegd.

[Gerard]

Boiling Point: Decomposes. (261°C or 501.8°F)

Melting Point: 239°C (462.2°F)

Ik kan me voorstellen dat dit komt doordat in labs waar met eiwitten wordt gewerkt een routine bestaat om toevoegingen aan agroseoplossingen bij 50^oC te doen omdat dit voor eiwtten noodzakelijk is om denaturatie te voorkomen

Als je naar de MSDS kijkt lijkt het voor EtBr niet noodzakelijk te zijn.

http://www.sciencelab.com/xMSDS-Ethidium_bromide-9927667

[Roy van Heesbeen]

Inactievatie van het molecuul is dus onzin. Maar goed, bij het koken van een gel heb je kans dat de EtBr in de lucht komt, wat niet bepaald goed is voor de gezondheid.

[Pink Panther]

Wij doen EtBr gewoon onmiddelijk bij de gel.

we koken dus eerst onze agarosegel (zonder EtBr) en halen we dat uit de over, doen er EtBr bij, roeren nog eens en dan gieten we deze vloeistof in het bakje.

Dus ontbinden is inderdaad onzin...

[lucilius]

Wij doen EtBr gewoon onmiddelijk bij de gel.

we koken dus eerst onze agarosegel (zonder EtBr) en halen we dat uit de over, doen er EtBr bij, roeren nog eens en dan gieten we deze vloeistof in het bakje.

Dus ontbinden is inderdaad onzin...

maar dan adem je het toch in? Of niet?

Ik merk dat als ik gel giet, er toch redelijk wat "damp" uitkomt en je het dan toch al makkelijk inademt.

of is het enkel carcinogeen bij aanraking met de huid?

[Fuzzwood]

Daar hebben ze dus zuurkasten voor uitgevonden.

[lucilius]

Daar hebben ze dus zuurkasten voor uitgevonden.

Ik heb in nog geen enkel labo waar men gels maakt gezien dat men dit doet in een zuurkast.

Misschien is het wel standaard in nederland?

[Fuzzwood]

Dat zal vast, maar ik hoop toch echt dat je de intuïtie hebt meegekregen die zegt: enge dampen --> zuurkast. Maar gaat het hier nog altijd over broomethaan of gewone gel?

[lucilius]

Ik heb het over het feit dat men standaard bij het maken van gels men de buffer tezamen met de agarose opkookt en nadien de ethidiumbromide toevoegt en dan de gel giet. Terwijl je giet, sta je met je hoofd gebogen over de de gel die je aan het gieten bent en adem je die dampen in...

Ik ga er altijd vanuit dat die ethidiumbromide dan gewoon al opgelost zit in je oplossing (de te gieten gel), maar aangezien daar dampen uitkomen, vermoed ik dat er ook deels ehtidiumbromide mee uitkomt.

[Fuzzwood]

Ah wacht ik dacht de hele tijd dat het hier over ethylbromide gaat. Dat heeft nl een kookpunt van 37 °C. Kom er net achter dat het om een kleurstof gaat. Maar ook in (water)damp kunnen stoffen meeliften. Of heb je nooit afgevraagd waarom je afzuigkap altijd zo vettig is na het frietenbakken?

Dus zorg er in ieder geval voor dat je nooit aerosolen zoals dat met een mooi woord heet (een suspensie van een stof in een gas) inademt.

[lucilius]

Akkoord, maar het lukt niet altijd.

Zoals reeds gezegd: bij het gieten van de gel adem je gewoon die dampen in.

[Gerard]

De concentratie van ethidiumbromide is gewoonlijk minder dan 1 ug/ml.

reken maar eens uit wat er in een 10 ml gel aanwezig is en wat er mogelijk in de lucht kan komen.

Ik zou meer inzetten om direct contact te voorkomen dus handschoenen en wegwerpmateriaal gebruiken en netjes afvoeren.