Fruit prepareren voor HPLC/redoxtitratie

[Thomas de Nacht]

Beste lezers,

Ik ben samen met een studiegenoot bezig een practicum te ontwikkelen waar wij het gehalte van Vitamine-C willen bepalen. Dit gaan wij op twee manieren doen, met redoxtitratie (thio en jood) en HPLC. Het uitvoeren van deze analyses is geen probleem, maar hoe prepareren wij ons monster. Wij willen uit gaan van een kiwi, maar als dat beter kan horen wij dat graag.

Alvast bedankt voor de hulp!

Ruud en Thomas

[Fuzzwood]

Dan is de eerste en belangrijkste vraag: waar lost vitamine C goed in op?

[Thomas de Nacht]

goed oplosbaar in water

[Fuzzwood]

Dus stel dat ik de kiwi tot moes heb geplet, wat zou er gebeuren als ik dat meng met goed warm water? De rest mag je zelf bedenken

[tequila boy]

A sample was homogenized by grinding or blending, depending on the nature of the sample. 5 grams of sample were weighed into propylene bottles, and 25 ml 0.1 M hydrochloric acid was added. The sample was sonicated for half a minute, and subsequently placed in a water bath at 90 °C for 30 minutes. When the sample was at room temperature again, the pH was adjusted to 4 with 1 M sodium acetate, 0.1 gram of taka-diastase (α-amylase) was added and the sample was placed in another water bath at 50 °C with magnetic stirring for 2 hours. Then 1 ml of 50 % w/v trichloroacetic acid was added, and the sample was placed in the 90 °C water bath for 10 minutes, after which the sample was allowed to reach room temperature again. The pH was adjusted to 6 with 10 M potassium hydroxide and the sample was diluted with the NH4H¬2¬PO¬4¬ mobile phase buffer to 50 ml in a volumetric flask. The solution was centrifuged at 6000 rpm for 10 minutes, filtered through a 0.45 m filter and analyzed on the HPLC

[Fuzzwood]

A sample was homogenized by grinding or blending, depending on the nature of the sample. 5 grams of sample were weighed into propylene bottles, and 25 ml 0.1 M hydrochloric acid was added. The sample was sonicated for half a minute, and subsequently placed in a water bath at 90 °C for 30 minutes. When the sample was at room temperature again, the pH was adjusted to 4 with 1 M sodium acetate, 0.1 gram of taka-diastase (α-amylase) was added and the sample was placed in another water bath at 50 °C with magnetic stirring for 2 hours. Then 1 ml of 50 % w/v trichloroacetic acid was added, and the sample was placed in the 90 °C water bath for 10 minutes, after which the sample was allowed to reach room temperature again. The pH was adjusted to 6 with 10 M potassium hydroxide and the sample was diluted with the NH4H¬2¬PO¬4¬ mobile phase buffer to 50 ml in a volumetric flask. The solution was centrifuged at 6000 rpm for 10 minutes, filtered through a 0.45 m filter and analyzed on the HPLC

Heb je hier ook een bron van?

[tequila boy]

Afstudeerscriptie 2007, Development of chemical analysis for food

[Jooken]

Het lijkt me sterk dat je hiermee Vitamine C naukeurig kan bepalen!

Wij bepalen vitamine C (als som van ascorinezuur en dehydroascorbinezuur) in groenten en fruit door extractie met een mengsel van metafosforig zuur en azijnzuur, en reactie met o-fenyleen diamine dihydrochloride. Het monster wordt gescheiden met HPLC en geanalyseerd met een fluorescentiedetector.

Referentie:

Dodson, K.Y., Young, E.R. & Soliman, A.M. (1992). Determination of total vitamin C in various food matrixes by liquid chromatography and fluorescence detection. Journal of AOAC International, 75, 887-891.

Indien gewenst heb ik wel gedetaillerde instructies.

Naar onze ervaring kan Vit C niet bepaald worden met UV detectie. De retentietijd is steeds gelijk aan de mobiele fasetijd.

[kaadeekaa]

Even reageren: als je retentietijd gelijk is aan je dode tijd, wil dat zeggen dat je niet de juiste kolom hebt. Op een C18-kolom lijkt het mij ook logisch dat er bijna geen retentie is. Echter, met polaire kolommen zoals ZIC-HILIC (Merck) of een ionenuitwisselaar, kan je perfect ascorbinezuur bepalen via UV .

Kijk even hier voor een applicatie: ZIC-HILIC Merck Sequant preparatief (maar makkelijk om te zetten naar een analytische app. en deze is nog beter ZIC-pHILIC Merck Sequant analytisch

--> Te bestellen via VWR-België

[Jooken]

Inderdaad, wij gebruiken altijd C18 kolommen.

[Mies030]

Wij bepalen vitamine C (als som van ascorinezuur en dehydroascorbinezuur) in groenten en fruit door extractie met een mengsel van metafosforig zuur en azijnzuur, en reactie met o-fenyleen diamine dihydrochloride. Het monster wordt gescheiden met HPLC en geanalyseerd met een fluorescentiedetector.

Yep, een zure extractie. En het is een som van ascorinezuur en dehydroascorbinezuur. Er zijn verschillende LC methoden. Of je zet alles enzymatisch om naar dehydroascorbinezuur of alles om naar ascorinezuur.

Maar Google gewoon eens een beetje. Dat geldt wel meer voor vragen hier. Ik weet dat het verleidelijk en lekker makkelijk is om hier dit soort vragen te droppen maar als chemie(?)student heb je vast via de opleiding literatuurbronnen die je kunt raadplegen. Maar met Google en/of scholar.google.com kom je een heel eind als je dit soort relatief simpele analyses zoekt.

Suc6!

[kaadeekaa]

beetje veel staalvoorbereiding om het in een echt labo te gaan gebruiken. Misschien wel interessant voor studentenpractica's, maar je geeft ze wel de boodschap mee dat Vit C enkel via ingewikkelde staalvoorbereidingen kan bepaald worden, terwijl dit eigenlijk met de huidige technologie aan HPLC en kolommen heel eenvoudig kan en zonder staalvoorbereiding...

Ik denk toch dat het belangrijk is om studenten een beeld te geven van de huidige manier van werken in de industrie ipv terug te grijpen naar methodes uit de jaren 80 en 90...

[Mies030]

beetje veel staalvoorbereiding om het in een echt labo te gaan gebruiken...

Ik denk toch dat het belangrijk is om studenten een beeld te geven van de huidige manier van werken in de industrie ipv terug te grijpen naar methodes uit de jaren 80 en 90...

Pardon?

Nestle , TNO, Eurofins... mi. zeer moderne en zeer gerenomeerde labs op het gebied van food and nutrition analyses. Het zijn in NL, en ws. ook Europees gezien, 1 van de weinigen die alle vitaminen kunnen analyseren. Deze labs werken met vrijwel dezelfde sample preparation en LC analyse voor de analyse van vit. C.

Ik heb het over food analyses. Dus matrices waar je o.h.a. absoluut niet vrolijk van wordt (e.g. petfoods, babyvoeding (infant formula's en dan met name de gehydrolyseerde producten als hyperallergenen melkpoeders), chocolade, cereals, etc.) en dus zeker niet met een simpele extracties quantitalief-verantwoord te volbrengen.

Ik weet niet op welke niet-jaren-80-90-methoden jij doelt maar LC analyse voor dit soort component is absoluut nog zeer gangbaar. Vergis jij je niet met vit. C. titrimetrisch of vitaminen die m.b.v. MBA geanalyseerd worden?

[kaadeekaa]

wel, die zeer gerenommeerde labs gebruiken heel vaak nog oude methodes (uit jaren 90) omdat deze gevalideerd zijn. Vermits het hier om een nieuw practicum gaat, lijkt het mij nuttig om nieuwe technologiën voor te stellen. Bijvoorbeeld de ZIC-HILIC kolom van Sequant is uitermate geschikt om zonder staalvoorbereiding Vit C te bepalen uit een complexe matrix.

Check: www.sequant.com, ga naar application notes en bekijk even de 2 methodes voor het detecteren van ascorbic acid...

Of download ze hier en hier.

[Anestro]

Wat ook kan is contact opnemen met Phenomenex.

Zij hebben ook een zeer goede HILIC kolom en eventueel kunnen zij je ook helpen aan een applicatie voor de vitamine C bepaling.

Je kunt ze vinden op www.phenomenex.com of 030-2418700.