wel of niet droog

[pimmodenhollander1]

Hallo allemaal.

Ik heb een vraag mbt glaswerk.

Als ik een maatkolf voorspoel met demi en daarna ga werken met eluens van water/methanol 50/50, moet ik mijn maatkolf dan drogen? Mijn docent zegt van niet en ikzelf denk ook van niet maar ik twijfel. Het schijnt te liggen aan welke nauwkeurigheid van je gevraagd wordt. Kan iemand me uitleggen wat ik het beste kan dooen?

[Derrek]

Als ze niet gedroogd wordt zal je water/MeOH verhouding natuurlijk ietsje hoger liggen dan 50/50. Moet je maar uitmaken of dat een probleem is voor hetgeen jij wil bereiken. Drogen, of voorspoelen met je water/MeOH mengsel om de juiste verhouding te krijgen in je maatkolf.

[pimmodenhollander1]

Wanneer zou dat uit kunnen maken? Dat snap ik namelijk niet.

[Echtepino]

Stel er blijven 10 moleculen water achter en je doet er daarna een hoeveelheid bij van 20 moleculen water en 20 moleculen MeOH.

Wat heb je dan uiteindelijk voor mengsel?

Lees voor moleculen ook ieder andere hoeveelheid.

[pimmodenhollander1]

Dan gaat het niet goed met je mengsel, maar in zulke hoeveelheden gebeurt het niet. Er blijven een paar druppels achter. Ik vraag mij af wat voor invloed het zal hebben op mijn verdere analyse.

Is anders nog een voorspoelprocedure met het oplosmiddel zelf handig? Of is dat niet goed? Want ik weet niet of een laboratorium HPLC grade MeOH daarvoor wil besteden. Aan de andere kant, als het mijn analyse beter maakt?

[Gerard]

Wat weet je van de gevolgen als je eluens niet precies 50/50 is maar bijvoorbeeld 52/48? Als je dit niet in beeld hebt is het zinloos te praten over de gevolgen van wel of geen droog glaswerk.

[LizanneS]

Je kunt heel gemakkelijk spoelen met demi water en daarna met ethanol.

Vervolgens drogen en klaar is kees.

[pimmodenhollander1]

Gerard,

1. Als mijn eluenscompositie iets verandert, zal ik dat ook in mijn retentietijden gaan terugzien. Alleen de eluens compositie verandert niet, wel mijn oplosmiddel. Kunnen mijn pieken daar minder van worden? Ik zou juist zeggen van niet, want je hebt een zwakker 'eluens' als oplosmiddel dan het eluens zelf. Mijn docent zegt juist van niet, omdat je dan kan krijgen dat je piek 'gebroken' wordt en daardoor breder. Wanneer mag dit wel en wanneer mag dit niet?

Als ik geen goede pieken krijg hierdoor, dan zal ik uiteraard ervoor kiezen om mijn glaswerk anders te prepareren.

2. Is het een goede optie om alles voor te spoelen met oplosmiddel?

Zo ja, 3x met demiwater en 2x met oplosmiddel?

Graag reacties!

[Jor_CF]

Ik neem aan dat dit geen probleem moet zijn. Met die paar druppels water verander je de compositie van je eluens nauwelijks. Als je op deze enkele druppels gaat letten, dan moet je ook maar gelijk je methanol en water exact gaan afwegen of met een volumepipet/Finnpipet gaan pipetteren en zou er eerder staan: gebruik een 50,0/50,0 MeOH/H2O eluens. Tenzij je exacte retentietijden gaat bepalen bij bepaalde stoffen (en Rf waarden) maakt dit niks uit. Je meot wel telkens hetzelfde doen bij elke bepaling.

Maar wat wil je nou gaan doen? Bij HPLC wordt het eluens door het apparaat zelf gemaakt. Wil je TLC doen? Wil je TLC doen? Wil je een synthese monitoren (dwz hoeveel product er is gevormd)? Je meot dat even aangeven, zonder die informatie kunnen wij ook niet zeggen hoe precies de samenstelling van je eluens moet zijn.

Als je wil dat je exact een 50/50 H2O/MeOH eluens hebt, dan maakt je dit eluens, gebruik je dit om je glaswerk meerdere malen te spoelen.

[Gerard]

[I]1. Als mijn eluenscompositie iets verandert, zal ik dat ook in mijn retentietijden gaan terugzien.

Theoretisch misschien wel maar in de praktijk bij zulke kleine afwijkingen niet

Alleen de eluens compositie verandert niet, wel mijn oplosmiddel. Kunnen mijn pieken daar minder van worden?

Theoretisch misschien wel maar in de praktijk bij zulke kleine afwijkingen niet

Ik zou juist zeggen van niet, want je hebt een zwakker 'eluens' als oplosmiddel dan het eluens zelf. Mijn docent zegt juist van niet, omdat je dan kan krijgen dat je piek 'gebroken' wordt en daardoor breder. Wanneer mag dit wel en wanneer mag dit niet?

Snap ik niet

Als ik geen goede pieken krijg hierdoor, dan zal ik uiteraard ervoor kiezen om mijn glaswerk anders te prepareren.

Ik zou eerst maar eens goed nadenken over wat de slechte pieken kan hebben veroorzaakt en niet direct me vastpinnen op het glaswerk.

2. Is het een goede optie om alles voor te spoelen met oplosmiddel?

Zo ja, 3x met demiwater en 2x met oplosmiddel?

Vast wel als je te weinig werk hebt, ik zou alleen met demiwater spoelen.

[pimmodenhollander1]

Beste gerard,

Dank voor je reacties.

Je zegt dat die kleine hoeveelheden niet uitmaken. Maar is dat ook zo als ik werk met een maatkolf van 10 ml waar na spoelen een paar druppels achterblijven. Dat water neemt ongeveer eeen procent van het volume in.

Is het dan ook zo dat ik waarschijnlijk niks merk aan mijn reetentietijden en pieekvormen?

[Gerard]

Pim,

Een ding nog ik heb in mijn hele carriere, bijna 40 jaar, dit soort reagens, loopvloeistoffen, extractievloeistoffen, buffers enz. nog nooit in een maatkolf gemaakt gewoon maatcylinders.

Als je bij mij de praktijk deed en je gebruikte maatkolven voor dit soort oplossingen dan leverde je het een onvoldoende op voor je werk omdat je blijkbaar geen inzicht hebt in wat je aan het doen bent.

Sorry dat het misschien hard klinkt maar blijkbaar dringt niet tot je door wat de mensen je willen vertellen.

[pimmodenhollander1]

Gerard,

Ik heb dat ook nergens gezegd. Dat lijkt mij ook logisch dat dat niet te bedoeling is, aangezien je te maken hebt met oplossingen die niet met een nauwkeurig eindvolume gemaakt worden.

Ik heb het over standaarden, die ik wél in maatkolven maak. De vragen die ik stel gaan over het maken van mijn standaarden, niet over het maken van mijn eluens of wat dan ook. Als ik die maatkolven voor het maken van mijn standaarden voorgespoeld heb, wat ik daar dan het beste mee kan doen als ik werk met oplosmiddelen die NIET voor 100% uit water bestaan?

[Jooken]

De samenstelling van het solvent waarin je standaarden en onbekenden zijn opgelost heeft totaal geen invloed op retentietijd of piekvorm op voorwaarde dat dit solvent minder sterk is dan het eluent dat je gebruikt voor de chromatografie. Dus als je elueert met 50% MeOH maakt een beetje meer water in het solvent niet uit, zolang de componenten maar opgelost blijven. (In feite verbetert de piekvorm als je solvent zwakker is, omdat de component geconcentreerd wordt op de top van de kolom.)

Als je solvent sterker is dan het eluent, dan beperk je best het injectievolume tot 5 µL.

[pimmodenhollander1]

Beste Jooken,

Dank voor je reactie!

Dus jij zou de maatkolven na spoelen met demiwater niet drogen bij het maken van de standaarden en de monsters? Daar gaat het mij om.