• Over
  • Forummenu

    • Plaats een reactie

    Je mail wordt niet openbaar getoond. Het wordt enkel gebruik voor contact of notificatie vanuit het beheer.

    🗨️ Wat vind jij? Stel direct je vraag of geef je mening – zonder registratie. Je reactie zet het topic weer bovenaan bij 'Laatste posts' en trekt snel nieuwe reacties aan🔥. Mocht je als vaste bezoeker willen reageren, dan kun je je ook registreren.

    Bevestig dat je geen robot bent door de volgende vragen te beantwoorden.

    Noor heeft 10 knikkers. Ze verliest er 4 in het gras. Hoeveel heeft ze er nog?

    Antwoord: (vul een getal in)

    Er zitten 5 vogels op een hek. Twee vliegen weg. Hoeveel blijven er zitten?

    Antwoord: (vul een getal in)

    Weergave uitklappen Voorafgaande berichten: Brede smeltcurve-piek bij real-time PCR

    Re: Brede smeltcurve-piek bij real-time PCR

    door Gideon » vr 19 mei 2006, 23:52

    Omdat je geen strakke smeltcurve krijgt denk ik dat in je cDNA amplificatie niet één zuiver product hebt. Je hebt nu dus een soort van smelttraject (dus van verschillende DNA fragmenten). Dit schiet me zo te binnen:

    - Wat voor gen amplificeer je, zijn je primers wel specifiek genoeg?

    - Wat is de bron van je cDNA en hoe heb je of is dit gemaakt?

    Brede smeltcurve-piek bij real-time PCR

    door kuiken » vr 19 mei 2006, 19:56

    Ik doe real-time PCR met SYBR Green. Ik gebruik 2 plasmideverdunningen en één cDNA staal en een blanco. De blanco blijft mooi negatief. Bij bekijken van de smeltcurves vallen de pieken van het cDNA en de plasmides bij dezelfde temperatuur, zoals verwacht, want hetzelfde fragment wordt geamplificeerd, MAAR, mijn cDNA piek is véél breder en niet zo scherp als de plasmide pieken (die mooi samenvallen). Wat is de verklaring hiervoor?

    Mvg
    Sciencetalk

    Hét onafhankelijke platform voor het delen van wetenschappelijke kennis en informatie