ik heb ook nog een vraag over dit onderwerp, namelijk

voor southern blotting heb je NaOH nodig, waarvoor dient dit. En wanneer je dit niet gebruikt welke gevolgen heeft dit voor de probehybridisatie??

Mijn DNA-DNA hybridisatie is gebaseerd op het hybridiseren in een speciale microtiterplaat.

Dit is een zogenaamde 'solid phase' methode.

Hierbij wordt ongelabeld referentie DNA (DNA waarvan ik weet van welke specie het is) aan de microtiterplaat gebonden.

Hierbij doe ik gelabeld test DNA (DNA waarvan ik niet weet van welke specie het is).

Dit hybridiseert met elkaar en daarna ga ik met m.b.v chemoluminescentie meten hoeveel DNA er aan elkaar is gebonden.

Soms moet je prehybridiseren om ervoor te zorgen dat het gelabelde test DNA niet aan je microtiterplaat bindt, maar in het protocol wat ik gebruik staat niks over prehybridiseren (en ik weet dat deze vraa gesteld gaat worden tijdens me afstuderen).

Of je moet prehybridiseren om a-specifieke bindingsplaatsen weg te vangen (nu wordt er tijdens de hybridisatie wel met blocking buffer gewerkt die dit doet).

Hoop dat jullie hier wat aan hebben.

Ik denk dat je bij DNA-DNA hybridizatie geen prehybridizatie nodig hebt omdat je probe waarschijnlijk niet non specifiek bij de methode die je gebruikt. Dus het is wel belangrijk om te weten welke techniek je gebruikt.

MvG Ron

Ik heb zo het idee als een non-bioloog, dat daar een legio aan methoden voor zijn hoor. Als je nu even verklapt welke jij gebruikt...

Uhh... misschien handig om te melden om welke techniek het gaat?

Hoe bedoel je?

Het gaat om een DNA-DNA hybridisatie, maar dat staat al in me eerste post

Uhh... misschien handig om te melden om welke techniek het gaat?

Wat is de functie/nut van een prehybridisatie?

Wat zijn de criteria hiervoor?

Soms moet je prehybridiseren om later aspecifieke binding te voorkomen; ik moet nu juist uitleggen waarom ik in mijn protocol voor een DNA-DNA hybridisatie niet hoef te prehybridiseren.