Facultafief anaërobe bacteriën kweken. (L. Casei Shirota & LGG)

[Stijn van der Veer]

Beste wetenschappers,
 
Met mijn onderzoeksgroep doe ik een onderzoek naar de overlevingskans van verschillende probiotica uit voedingsmiddelen.
Dinsdag hebben wij een decimale verdunningsreeks ingezet om van te voren te controleren hoeveel bacteriën er in de producten zitten (Yakult, ViFit en een gevriesdroogde pil). 1ml van deze verdunningen zijn aangebracht IN plate count agar, omdat we de bacteriën anaëroob willen kweken. 
Volgens de hypothese zou er kolonievorming zichtbaar moeten zijn, maar dit is niet gebeurd. Op dit moment staan de platen in een anaërobe pot voor 48 uur met de hoop dat de bacteriën nu wel gaan groeien.
 
Het schijnt dat de bacteriën in deze producten lastig te kweken zijn. Is hier iemand die daar ervaring mee heeft en tips heeft voor het kweken van deze bacteriën?
 
 

[ArcherBarry]

bij welke temperatuur heb jij de petrischalen weg gezet?

[Stijn van der Veer]

Bij 37 graden Celcius

[Kravitz]

Opmerking moderator

Verplaatst naar het vakforum voor microbiologie.

[ArcherBarry]

Het is een behoorlijke tijd geleden dat ik met melkzuurbacteriën bezig ben geweest maar ik kan zo snel 3 reden bedenken waarom je (nog) niets ziet.
 
1) pH van je medium is te hoog, wanneer ik melkzuur bacteriën bepaalde voegde wij altijd zuur toe aan het medium (of een kant en klaar zuur medium)
2) jou anaërobe omgeving is aëroob. doos niet goed sluitend of katalysator werkt niet goed.
3) je moet langer wachten, volgens mij was er een incubatietijd van 3-5 dagen, maar weet ik niet zeker meer.

[marthoogland]

Plate count agar is niet de aangewezen voedingsbodem voor het kweken van melkzuurbacterien. Probeer hiervoor in eerste instantie MRS (medium volgens Mann Rogosa and Sharpe) en/of Elliker medium eventueel iets in pH verlaagd met azijnzuur. Strikt anaerobe kweekcondities zijn niet noodzakelijk voor mz bacterien. Daarnaast bevatten probiotische dranjes vaak Bifidobacterien die over het algemeen veel moeilijker te kweken ivm specifieke voedingsbehoeften. 

[Stijn van der Veer]

Dankjulliewel voor jullie reacties!

[Stijn van der Veer]

Ik wil graag toch nog even gebruik maken van jullie expertise. De MRS agar die gister gemaakt is en in de autoclaaf is geweest werd vanochtend gevonden met een bijna zwarte in plaats van amber kleur. Hoe kan dit en is het erg voor de kwaliteit en functie van de agar?

[ArcherBarry]

In kort, er is iets mis. dus jij weet niet zeker of jouw groeimedium goed is. dus extra variabele = niet bruikbaar.
 
Daarnaast altijd een positieve en een negatieve controle voor het medium uitvoeren. Alleen dan kan jij zeker zijn dat jou medium correct is.