Blauw wit screening

[ChrisFS]

Hallo,

Bij een casus van de laatste periode hebben wij een gen ingebouwd in e.coli mbv een pgemteasy vector. Wij hebben een blauw wit scrwening gedaan, en er waren 3 soorten kolonies; blauwe, witte en witte kolonies met een blauw puntje in het midden. Uiteraard betekent dit bij de blauwe kolonies dat het gen er niet in zit, en bij de witte wel. Maar hoe zit het met de witte kolonies met blauw puntje? Deze hebben we nog gedigesteerd en gescheiden met een gel elektroforese. Hieruit bleek dat het gen wel aanwezig was. Nou is mijn vraag waarom dit blauwe puntje aanwezig was? Het lacz gen was onderbroken maar toch is er xgal omgezet door b galactosidase.

[ArcherBarry]

was de 3e soort echt E-coli? zal bijna verwachten dat het een sporenvormer zal kunnen zijn.

[ChrisFS]

We gebruikten competente dh5alpha e.coli cellen. Na een 45 seconde 42°C heatshock werd de vector ingebracht.

Ik heb nog verder gekeken, en mogelijk was het insert te klein; 654 bp