TCA precipitatie

[Trillian_CF]

Hey,

ik ben student bio-medische wetenschappen en loop nu stage. Als onderdeel van mijn stage moet ik een bindings/flotatie assay doen met liposomen en virussen. Ik moet dan vervolgens die virussen en liposomen uit de fracties halen om op een Western Blot aan te kunnen tonen. Ik heb geprobeerd dit te doen met een TCA precipitatie, omdat ik had begrepen dat 'vrijwel alles' precipiteert met TCA, maar het wil maar niet lukken! Ik vind telkens niks terug....

weet iemand misschien hoe dit komt? Heeft het misschien te maken met het feit dat het in een sucrose oplossing zit (van 5% tot 50%) of omdat de liposomen en virussen te groot zijn? En heeft iemand misschien een tip over hoe het dan wel kan?

[Hovinsj1]

In principe moet je met TCA juist grote eiwitten efficient kunnen neerslaan. Wat ook nog wel eens wil helpen is een Aceton/TCA precipitatie. Wel is het belangrijk dat de precipitatie op ijs gedaan wordt.

Kan het in dit geval zo zijn, dat het geprecipiteerde materiaal - nadat het gepelleteerd is - niet terug in oplossing gaat (ik neem aan, dat het een gelbuffer is in dit geval). Dit is een verschijnsel dat we vaak zien bij geprecipiteerde eiwitten in de 2D elekroforese.

[Trillian_CF]

ik doe de precipitatie idd op ijs en was daarna ook met aceton. Het kan best zijn dat het daarna niet meer oplost (in eiwit loading buffer voor SDS-PAGE), maar ik zie om te beginnen al niet echt een pellet...