Bacteriele transformatie

[Roy van Heesbeen]

Hallo,

Ik ben op zoek naar iemand die veel ervaring/verstand heeft van transformatie van vectoren in E.coli

Is hier iemand op het forum die er veel van af weet?

[biochemiefreak]

Wat wil je er van weten dan? Dit is wel een beetje kort door de bocht.

Ik weet er wel iets van misschien kan ik je verder helpen, maar plaats je vragen op het forum.

MvG Ron

[Roy van Heesbeen]

Ik heb voor mijn onderzoek diverse transformaties uitgevoerd, die altijd een positief resultaat geven. Echter ben ik nu met een andere vector (GFP vector) aan het transformeren, en er ontstaan geen kolonies meer op mijn platen.

Ik heb zelf nog geen idee wat daarvan de oorzaak zou kunnen zijn. GFP is normaal gesproken niet giftig voor E.coli XL Blue en mijn eiwit van het onderzoek ook niet. Ik vraag me nu af of het mogelijk is dat mijn gemaakte fusie eiwit mogelijk dodelijk is voor E.coli.

Weet jij of dit zou kunnnen of heb je ook ervaring met mislukte transformaties?

Normaal gesproken hoort mijn fusie eiwit niet dodelijk te zijn.

Een aantal weken terug is het namelijk wel goed gelukt, alleen toen bleek er achter een frame-shift in mijn vector te zitten waardoor mijn onderzoekseiwit niet correct werd afgelezen.

[Roy van Heesbeen]

Naar diverse keren opnieuw transformeren is het nu wel gelukt met dezelfde ligatie producten

[biochemiefreak]

Zijn er nog dingen die je hebt veranderd in de procedure?

Of was het meer kansrekenen?

Veel succes met je transformaties.

MvG Ron