Blocken ELISA

[Ilka_CF]

Hallo,

Zelf ben ik bezig met het uitvoeren van een ELISA.

Er is alleen 1 probleem waar ik mee zit.

Wat doet de blocking stap precies?

Alvast bedankt

[Gerard]

Blocking dient om alle plaatsen die aspecifiek eiwitten kunnen binden te bezetten waardoor je een lagere achtergrond krijgt.

[Ilka_CF]

Hecht er dus ook niks anders (2de antilichaam) dan de kleuringsstap aan het eiwit dat in de blockingbuffer zit?

[Gerard]

Normaal gesproken niet maar je moet wel in de gaten houden waarmee je werkt.

Als je bv anti-humaan albumine gebruikt dan niet blocken met Human Serum Albumine maar met bv melkeiwit.

[Roy van Heesbeen]

Het is eigenlijk een soort van competitie tussen je block eiwit en je antilichaam.

Hoe specifieker (hogere affiniteit) je antilichaam, hoe beter je resultaat wordt.

[Ilka_CF]

Heeft iemand toevallig ook nog info waar iedere stap toe dient?

Coaten, Blocken, monster opbrengen e.d.

Ik heb te maken met een sandwich ELISA.

Op het internet vind ik echt weinig informatie.

Ook op de forum vind ik tot mijn spijt geen diepgaande info, waar ik echt iets aan heb.

Alvast bedankt!

[Gerard]

Op de site van PIERCE staat veel ondersteunende informatie voor elisa op de volgende link

http://www.piercenet.com/Proteomics/browse...2E-836FE09D8403