Western blot kleuring

[Bioshock]

Hoi,

Het volgende probleem:

Ik ben bezig met een western blot. Na een nacht incuberen met serum heb ik de volgende dag de blot ingezet met anti-humaan-rabbit-antilichaam. Wat nu blijkt is dat de tweede stap goat-anti-rabbit-antilichaam (Enzym) niet aanwezig is.

We hebben onze blots maar op TBS-T(wasbuffer) gezet en laten dit in de koeling staan tot het substraat weer aanwezig is.

Vraag:

Heeft dit invloed op de kleuring van mijn blot? Er zitten schimmeleiwitten op die al niet zo sterk kleuren.

Blijft het anti-hum.-rabbit al die tijd zitten, of is het beter om deze stap later te herhalen?

Raad iemand een andere opslagmethode aan?

Alvast bedankt.

[Gerard]

Op zich lijkt me het in PBST wegzetten in de koelkast geen probleem hangt een beetje vanaf hoelang.

Als het langer duurt zou ik de PBST vervangen door PBST met azide of thiomersal om bederf tegen te gaan.

Iets anders is om de blot gewoon aan de lucht te drogen, ik heb geen ervaring met al met antiserum geincubeerde blots, maar alleen geblotte stroken drogen aan de lucht gaat goed en ze blijven in ieder geval weken goed is mijn ervaring.

[Bioshock]

De opslagmethode was prima voor een week. Het enzym was binnen gekomen en de blotjes kleurden prima.