Vitamine B12 door fermentatie

[mverdo]

Hallo

Voor mijn onderzoek maak ik gebruik van P. Denitrificans om vitamine B12 aan te maken. De bacteriën worden gekweekt in een medium bestaande uit: sucrose (30g/l); glutaminezuur (5,8g/l); NZ case (Kraft Inc. 10g/l); betaine (10g/l); magnesiumsulfaat (1,5g/l); diammoniumwaterstoffosfaat (3g/l); zinksulfaat (0,02g/l); ijzersulfaat (0.03g/l) natrium-molybdeentrioxide (0.005g/l); cobaltdichloride (0.12g/l); kaliumchloride (0.9g/l) en 5-6-dimethylbenzimidazole (0.045g/l).

Fermentatie gebeurt 5 dagen bij 28°C.

Vitamine B12 wordt gezuiverd door: centrifugatie, gevolgd door behandeling van het supernatans met ijsazijn en natriumnitriet (8%) en tenslotte filtratie (0.22µm poriën)

Na analyse met ELISA bekom ik steeds vrij goeie resultaten, maar wanneer ik dezelfde stalen analyseer met HPLC krijg ik telkens onmogelijke waarden na spiken.

Vermoedelijk zijn er te veel interfererende stoffen in de matrix, maar ik heb niet direct een idee hoe ik deze opspoor en/of omzeil.

Iemand een idee hoe dit misschien kan opgelost worden?

Bedankt op voorhand

[mardiiiii]

heb je al geprobeerd om bij de hplc een andere drager te gebruiken?

heb je controleert hoe polair VIT B12 is en wat de Polariteit van de stationaire en de mobiele fase is?

dit heeft veel invloed op de uitslag van een hplc