vraagje over ELISA

[stef.]

Hallo iedereen! ik zit met een vraagje over ELISA. Ik heb de vragen over dit onderwerp gelezen, maar spijtig genoeg zit niemand met dezelfde vraag

Ik begrijp het principe van Elisa wel, maar ik begrijp eigenlijk niet goed waarom je op je antigen eerst een antilichaam laat binden dat specifiek is voor dat antigen en daarna aan antilichaam laat binden die specifiek is voor het eerste antilichaam, met daarop dan een enzyme gebonden (of zoals bij RIA een radionuclide). Waarom wordt er niet gewoon op dat eerste antilichaam, dat rechtstreeks bindt met het antigen, een enzym geplaatst of een radionuclide. Dan is dat tweede antilichaam toch helemaal niet nodig! Ik veronderstel dat dit wel een reden heeft, maar welke is me dus een raadsel...

Kan iemand me helpen?

alvast bedankt!

Stef.

[Gerard]

Het heeft een reden zoals je veronderstelt.

Je eerste antilichaam bindt je op een drager, microtiterplaat sepharose ed, en als het antigeen is gebonden kun je de matrix van het antigeen wegwassen waardoor geen last meer hebt van storende interferenties die mogelijk in de matrix zitten. dan het secundaire gelabelde antilchaam koppelen, je substraat en voila een specifieke uitslag.

[Roy van Heesbeen]

Welke Elisa techniek bedoel je precies dan? je hebt een paar verschillende.

Meestal it het antilichaam gecoat op je microtiterplaat (diagnotische testen), maar je kan natuurlijk ook je antigeen coaten op de plaat.

[CitroenisZuur]

geinige site over de ELISA techniek

http://www.biology.arizona.edu/immunology/...lisa_intro.html

[stef.]

Je eerste antilichaam bindt je op een drager, microtiterplaat sepharose ed, en als het antigeen is gebonden kun je de matrix van het antigeen wegwassen waardoor geen last meer hebt van storende interferenties die mogelijk in de matrix zitten. dan het secundaire gelabelde antilchaam koppelen, je substraat en voila een specifieke uitslag.

In onze cursus is het zo dat het antigen altijd gehecht wordt aan de matrix, daarop bindt dan het eerste antilichaam en op dit eerste antilichaam bindt dan een tweede antilichaam met specificiteit voor het eerste antilichaam. Hebben we het dan over dezelfde techniek??

[Gerard]

Nee niet helemaal, in jou geval worden de twee stappen gebruikt om aspecifieke binding te verminderen en/of om het aantal enzymen dat uiteindelijk gebonden wordt te verhogen.

Of je de twee antilichamen kunt vervangen door een enkel antilichaam kunt zul je in de praktijk moeten testen.

Typo