Immuno blot

[femflim]

Hallo!

ik ben bezig met een blot op te zetten voor een aantal antigenen.

In het kort de werkwijze; coating antigenen op nitrocellulose, serum incubatie (met antilichamen), vervolgens anti-Ig...conjugaat en als laatste substraat.

Voor IgG in serum is dit gelukt. Nu wil ik graag IgM aantonen, dus gebruik anti-IgM conjugaat. Dit lukte ook wel, maar... om vals positieven uit te sluiten heb ik daarna getest met RF-absorbent.

Nu blijkt dat er met RF-abs. bij alle antigenen bandjes ontstaan (16x!).

Alleen RF-abs. (zonder sera) levert ook overal bandjes op, maar iets lichter. Het reageert op een of andere manier met anti-IgM conjugaat, maar hoe? Heeft iemand een idee??

Buffers getest, geen verschil.

voorgeschreven uitvoering RF-abs. gevolgd, getest, geen verschil.

Iemand suggesties???!!!!!